Sammendrag
Sammendrag
Introduksjon: Det immunosuppressive legemidlet cyklosporin A (CsA) gjennomgår utstrakt metabolisme til mer enn 30 metabolitter. De primære metabolittene er AM1, AM9 og AM4N, og disse er vist å bli dannet via cytokrom P450 3A4 (CYP3A4). Metabolismen av CsA til AM1 og AM9 har tidligere blitt beskrevet å utvise atypisk enzymkinetikk, såkalt substrathemming, in vitro. For midazolam er det vist at ulike mikrosommodeller kan gi ulik enzymkinetikk. Hensikten med dette arbeidet var derfor å studere metabolismen av CsA i insektmikrosomer og humane mikrosomer som spesifikt uttrykker CYP3A4, i tillegg til å overføre analysemetoden for metabolittene AM1 og AM9 fra HPLC koblet til ionefelle MS/MS til UPLC koblet til trippelkvadrupol MS.
Metode: En analysemetode for bestemmelse av CsA-metabolittene AM1 og AM9 ble overført til UPLC-MS og validert for linearitet, nøyaktighet og presisjon. Metabolismestudier med CsA i konsentrasjonsområdet 0-100 µM, ble utført med insektmikrosomer med CYP3A4, cytokrom P450 reduktase, med (n = 3) og uten (n = 1) cytokrom b5, og i humane CYP3A4-mikrosomer (n = 3).
Resultater: Valideringen av den nye analysemetoden viste linearitet med korrelasjonskoeffisient (r2) bedre enn 0,9966 for metabolittene AM1 og AM9. Alle verdiene for intra- og interdag nøyaktighet og presisjon lå under 5 % avvik fra sann verdi og 9 % variasjon. Dannelsen av CsA-metabolittene AM1 og AM9 viste Michaelis-Menten liknende enzymkinetikk i alle de tre mikrosomsystemene. Det ble funnet signifikant forskjell mellom estimerte CLint-verdier for metabolitt AM1 i insektmikrosomene med cytokrom b5 og de humane CYP3A4-mikrosomene (P = 0,021). Forholdet mellom AM1 og AM9 for Vmax og CLint ble henholdsvis 2,9 og 4,2 i de humane CYP3A4-mikrosomene, mot 0,9 og 1,3 i insektmikrosomene med cytokrom b5.
Konklusjon: Forskjeller i enzymkinetiske parametre og metabolittmønster for metabolismen av CsA i humane CYP3A4-mikrosomer og insektmikrosomer med CYP3A4, som er funnet i denne oppgaven, kan være av betydning for in vitro-in vivo ekstrapolering av legemiddelmetabolisme, og bør derfor studeres videre.