Dried blood spots på oppløselige polymere i kombinasjon med ulike prøveopparbeidelsesmetoder

Abstract

I dette arbeidet er bruk av dried blood spots (DBS) på den oppløselige polymeren karboksymetylcellulose (CMC) undersøkt. Hensikten har vært å se om oppløselige polymere som materiale for DBS kan kombineres med de konvensjonelle prøveopparbeidelsesmetodene fast-fase ekstraksjon (SPE) og felling, samt den nye ekstraksjonsmetoden parallel artificial liquid membrane extraction (PALME). Bruk av DBS forenkler blodprøvetaking og reduserer blodprøvevolumet sammenlignet med tradisjonelle metoder for blodprøvetaking. I tillegg er lagring og transport av prøvene enkelt. Ved å bruke CMC som materiale for å avsette blodprøvene, kan prøvene løses fullstendig opp før prøveopparbeidelsen. Modellanalyttene; amitriptylin, fluoxetin, haloperidol og quetiapin, ble tilsatt til blankt fullblod og avsatt på CMC i dråper på 5 µl før de ble tørket, stanset ut og oppløst. Deretter ble de oppløste prøvene opparbeidet med en av de tre prøveopparbeidelsesmetodene og analysert på HPLC eller LC-MS. Bruk av felling med acetonitril ga utbytter i området 87-97 % for de fire modellanalyttene. For PALME lå utbyttene på 49-90 %. SPE viste seg i midlertid vanskelig å kombinere med DBS fordi blodkomponenter tettet kolonnen og ga et forurenset eluat. Metoden for felling ble evaluert for modellanalytten quetiapin ved bruk av LC-MS. Resultatene viste linearitet i konsentrasjonsområdet 10-1000 ng/ml med r2>0,99, og det relative standardavviket (RSD) var <15 %. Deteksjonsgrensen (LOD) for quetiapin ble målt til 0,8 ng/ml og kvantifiseringsgrensen (LOQ) 2,8 ng/ml. Målinger av CMC i ekstraktene fra SPE og felling viste at >99 % av polymeren blir fjernet fra prøven ved bruk av felling med acetonitril. For SPE forsvinner det meste av polymeren ut med den påsatte prøven eller vaskeløsningene og kun rundt 1 % finnes igjen i ekstraktet. Målinger av CMC ble ikke gjennomført for PALME. Dette arbeidet har vist at DBS på oppløselige polymere kan kombineres med felling og PALME, men foreløpige resultater tyder på at kombinasjonen med SPE er vanskelig.