Utforsking av faktorer som kan påvirke vekst hos Francisella noatunensis subsp. i laboratoriet og kloning av clpB for funksjonsanalyser av proteinet ClpB hos F. noatunensis subsp noatunensis.

Abstract

Francisella noatunensis subsp. noatunensis er en Gram-negativ bakterie som forårsaker systemisk infeksjon hos torsk i oppdrettsnæringen i Norge. Forskjellige stammer av F. noatunensis gir også sykdom hos andre arter fisk både i ferskvann og saltvann i oppdrettsanlegg rundt om i verden. Sykdom forårsaket av F. noatunensis har fått navnet francisellose. Den gir fisken granulomer hovedsakelig i lever, milt og hjerte. F. noatunensis tilhører samme genus som F. tularensis som er en svært infeksiøs bakterie. F. tularensis gir sykdom hos dyr, deriblant menneske og er et potensielt biologisk våpen. F. noatunensis er en relativt nyoppdaget bakterie, og det finnes foreløpig ingen effektiv behandling mot francisellose. Bakterien er en fakultativ intracellulær bakterie, noe som gjør utvikling av effektiv antibiotika og vaksiner utfordrende. Bakterien vokser sakte og trenger næringsrikt medium. I denne oppgaven ble det sett på mulige faktorer som kan påvirke veksten av bakterien i laboratoriet. Påvirkningen av antibiotikumet ampicillin, sonikering, mediene PBS og L-15 ble undersøkt for tre forskjellige stammer av F. noatunensis. Det ble også undersøkt om antall pipetteringer per overføring påvirket CFU når det ble laget fortynningsrekker. Ampicillin hemmet veksten av F. noatunensis subsp. orientalis stammen, men ikke de to F. noatunensis subsp. noatunensis stammene. CFU ble ikke endret av sonikering, PBS, L-15 eller antall pipetteringer. pKK214 og pDMK2 er plasmider som brukes i arbeid med Francisella. Disse ble sekvensert og det ble etablert hva slags restriksjonsenzymer som kan brukes i videre arbeid. En mutasjon i genet som koder for stressproteinet clpB er en mulig vaksine mot F. tularensis. I forbindelse med funksjonsanalyser av clpB hos F. noatunensis, ble det laget et histidin-merket clpB konstrukt. En F. noatunensis subsp noatunensis clpB delesjonsmutant ble komplementert med en ekspresjonsvektor som utrykker clpB. Etter komplementeringen av clpB-delesjonsmutanten ble det gjennomført vekstforsøk for å se om clpB kan ha innvirkning på veksten til bakterien. Det ble ikke sett registrert noen forskjell.