Mulig interaksjon mellom NMDA reseptorsubenheten 3A og glukokortikoidreseptoren

Abstract

Deksametason er et syntetisk glukokortikoid som er mye brukt i forebygging og behandling av bronkopulmonal dysplasi hos premature barn. Denne behandlingen har vist seg å føre til hemmet nevrologisk utvikling hos mange av barna som har fått denne behandlingen. Det er tidligere vist at deksametason er toksisk for flere typer celler i kultur. En interaksjon mellom glukokortikoidreseptoren (GR) og NMDA reseptoren kan være mekanismen bak denne toksisiteten i nevroner, siden NMDA reseptorantagonister reduserer toksisiteten. NMDA reseptorer er heteromere komplekser som består av flere subenheter, og disse subenhetene uttrykkes i ulike grad under utviklingen. Tidligere arbeid i laboratoriet har vist en mulig interaksjon mellom GR og NMDA reseptorsubenheten 3A. I dette prosjektet ble kyllingkornceller brukt til å undersøke om aldosteron og deksametason induserer celledød i nevroner. Det ble vist at både deksametason og aldosteron induserer liknende celledød i kyllingkornceller. Videre ble en cellelinje (CV-1 celler) brukt til å undersøke om: CV-1 celler uttrykker NR3A eller GR naturlig; NMDA reseptorsubenhetene fordeles til cellemembranen etter transfeksjon; aldosteron, et mineralkortikoid, kan aktivere GR i et luciferase assay; NFκB-luc promotoren nedreguleres av GR og mineralkortikoidreseptoren (MR); NMDA reseptorantagonister kan påvirke GRs transkripsjonelle aktivitet; det er en interaksjon mellom GR og ulike NMDA reseptorsubenheter og om karboksylterminalen til GR er involvert i interaksjonen. Westernblotting, fluorescensmikroskop og luciferase assay som kan reguleres av GR ble brukt. Det ble bekreftet at CV-1 celler ikke uttrykker GR eller NR3A naturlig. NMDA reseptorsubenhetene fordelte ikke til cellemembranen etter transfeksjon av subenhetene hver for seg. Aldosteron aktiverte GR ved høyere konsentrasjon enn deksametason. GR i motsetning til MR nedregulerte NFκB-luc promotoren. NMDA reseptorantagonister påvirket ikke GRs agonistinduserte transkripsjonelle aktivitet. CV-1 celler ble ko-transfektert med GR og NMDA reseptorsubenheter, og tilstedeværelse av NR3A hemmet GRs nedregulering av NFκB-luc promotoren. Dette støtter antagelsen om en interaksjon mellom GR og NR3A, og kan ha betydning for mekanismen for deksametasons nevrotoksisitet hos premature barn.