Påvisning av strukturforskjeller mellom erytropoietin fra humant serum og rekombinant humant erytropoietin

Abstract

Erytropoietin fra humant serum ble isolert ved hjelp av immunomagnetisk ekstraksjon, og karakterisert ved hjelp av natrium dodecyl sulfat - polyakrylamid gelelektroforese (SDS-PAGE) med hensyn på størrelse, og isoelektrisk fokusering (IEF) med hensyn på ladning.

Systemet for immunodeteksjon ble optimalisert ved å teste ut de ulike trinnene i immunoblottingsprosedyren, som blokkering av PVDF-membranen, ulike biotinkonjugerte antistoff, streptavidin-horseradish peroxidase og kjemiluminescenssubstrater.

Det var mulig å detektere hEPO fra serum fra normale individ. Det ble påvist at hsEPO fra friske individ og anemipasienter har samme molekylmasse, samt at rhEPO har større molekylmasse enn hsEPO. Det ble påvist at 70-80 % av hsEPO og epoetin omega er O-glykosylert.

Det ble vist at hsEPO fremdeles inneholder negative ladninger etter behandling med sialidase fra Arthrobachter ureafaciens. Resultatene tyder på at hsEPO inneholder negative ladninger som skyldes andre grupper enn sialinsyrer.

Den signifikante størrelsesforskjellen mellom endogent EPO fra serum fra normale individ og rhEPO, kan danne grunnlag for en alternativ dopingtest.