Identifisering av mulige interaksjoner mellom NGFI-B og proteiner i BCL-2-familien

Abstract

Sammendrag Apoptose (programmert celledød) er en mekanisme som har betydning i mange ulike typer sykdommer, f.eks nevrodegenerative sykdommer og kreft. NGFI-B (nerve growth factor-inducible clone B) er en kjernereseptor som er involvert både i celleoverlevelse og celledød. Når NGFI-B er lokalisert i kjernen fungerer den som en transkripsjonsfaktor som fremmer proliferasjon og overlevelse. Ved ulike signaler kan NGFI-B translokeres til mitokondriene og indusere apoptose. Dette kan skje ved at NGFI-B interagerer med et antiapoptotisk protein kalt BCL-2 (B-cell lymphoma protein 2), og omdanner BCL-2 fra å beskytte til å indusere apoptose av cellen. BCL-2 tilhører en gruppe antiapoptotiske proteiner, som sammen med en proapoptotisk proteingruppe utgjør BCL-2-familien. Det er den relative konsentrasjonen av antiapoptotiske og proapoptotiske BCL-2 proteiner som avgjør om cellen går inn i apoptose. I denne oppgaven ble det undersøkt om to andre BCL-2 proteiner, de pro-apoptotiske proteinene BAX og BAD, interagerte med NGFI-B. Dette ble gjort ved å overuttrykke proteinene i CV-1 celler og analysere dem ved bruk av en luciferasemetode, hvor transkripsjonen av luciferase var NGFI-B avhengig. Ulike konsentrasjoner av BAX og BAD ble i separate forsøk brukt for å se om dette ga tilsvarende reduksjon i luciferaseverdiene. BAX og BAD så ut til å gi en doseavhengig reduksjon i luciferaseverdiene noe som kan indikere at det foreligger en interaksjon mellom BAX/BAD og NGFI-B i cytosol. Luciferasemetoden ble også brukt til å se på hvordan inaktivering av fosforyleringssetene threonin-142, serin-139 og threonin-350 på NGFI-B, påvirket interaksjonen mellom NGFI-B og BCL-2. Dette ble også studert i CV-1 celler. NGFI-B Thr-142 mutanten så ut til å gi en sterkere interaksjon med BCL-2 enn NGFI-B-wt. NGFI-B Ser-139 mutanten så ikke ut til å påvirke interaksjonen med BCL-2 og Thr-350 NGFI-B mutanten så ut til å gi en svakere/ingen interaksjon med BCL-2 sammenlignet med NGFI-B-wt. Konklusjonen er at NGFI-B synes å interagere med medlemmer av BCL-2-familien, og at denne interaksjonen kan være avhengig av NGFI-Bs fosforyleringsstatus.