Immunoaffinitets-MS som nytt anti-dopingverktøy : Bestemmelse av hCG i urin og serum

Abstract

hCG er et endogent glykoproteinhormon som kan detekteres i urin og blod hos gravide kvinner samt i forbindelse med visse former for kreft. hCG stimulerer til progesteronproduksjon i eggstokkene hos kvinner og testosteronproduksjon i testiklene hos menn. Ved siden av bruk i diagnostikk, står hCG også oppført på WADAs dopingliste for menn. Ved misbruk av anabole androgene steroider (AAS) reduseres endogen testosteronproduksjon. Injeksjon av hCG i løpet av en steroidsyklus øker endogen testosteronproduksjon og reduseres graden av AAS-bivirkninger. hCG er ikke vist å ha positiv effekt hos kvinner.

Hensikten med oppgaven var å verifisere at immunoaffinitets-MS-metoden utviklet av Hanne Lund et al. kan brukes til deteksjon av ulovlig injisert hCG for på sikt å kunne implementeres i WADAs antidopingarbeid. En studie med 25 friske frivillige menn ble gjennomført. Gruppen ble delt i to hvor hver halvdel fikk et av to hCG-preparater, Pregnyl® eller Ovitrelle®. Pregnyl® inneholder endogent hCG ekstrahert fra urin fra gravide kvinner, mens Ovitrelle® inneholder rekombinant hCG. Det ble samlet inn 10 urinprøver og 7 blodprøver fra hver deltaker. Prøvene ble opparbeidet ved bruk av magnetiske kuler coatet med et hCG-spesifikt antistoff. Etter redusering, alkylering, tryptisk klipp og SPE, ble prøven analysert med LC-MS/MS i SRM-mode.

24 av 25 deltakere fullførte studien. 237 av 240 urinprøver og 167 av 168 serumprøver ble samlet inn og analysert. Resultatene viste at denne metoden med sikkerhet kan detektere hCG i minst 7 dager i serum og i minst 10 dager i urin. Det var ikke mulig å skille mellom Pregnyl® eller Ovitrelle® ved analyse av serumprøvene, men deteksjon av degraderte hCG-varianter i enkelte urinprøver indikerte injeksjon av Pregnyl®. Metoden kan ikke skille mellom endogent produsert hCG (eks. kreft) og tilført hCG (doping). Utøvere som tester positiv må derfor fremdeles henvises til klinisk kontroll før de kan dømmes for brudd på dopingbestemmelsene. Metoden egner seg godt til deteksjon av hCG i både urin og serum, og bør på sikt implementeres i WADAs analyserutiner som bekreftelsesmetode når hCG er påvist i screeninganalyser ved bruk av immunoassays.