T-celle spesifikt adapterprotein (TSAd) og utviklingen av kreft : På jakt etter nye bindingspartnere for TSAd

Abstract

Bakgrunn: T-celle spesifikt adapterprotein (TSAd), som blir kodet av genet SH2D2A, er et protein som er involvert i protein-protein interaksjoner i signaloverføing som skjær når T-cellen aktiveres. TSAd er uttrykt i T-celler, NK-celler, endotelceller og eptitelceller. TSAd består av et SH2-domene, et prolinrikt område og 10 tyrosiner som kan fungere som fosforyleringsseter. Tidligere har det blitt gjort funn som tyder på at fravær av TSAd fører til svekket T-celledød og utvikling av autoimmunitet, multippel sklerose (MS) og juvenil revmatoid artritt (JRA). TSAd er kjent å interagere med VEGFR-2 pY951, og denne interaksjonen er viktig for angiogenese (karutvikling), som igjen er viktig for utviklingen og vekst av tumorer. Nyere forskning peker i retning på at mangel på TSAd fører til økt T-celleresistens mot tumorvekst. Mål med oppgaven: Denne oppgaven fokuserer å påvise nye interaksjonspartnere for TSAd sitt SH2-domene, samt undersøke bindingsspesifisiteten for interaksjonen mellom TSAd-SH2 og VEGFR2 pY951 Metode: Peptidarray ble brukt som metode for å finne nye interaksjonspartnere til TSAd-SH2. Utvalgte funn ble bekreftet ved hjelp av pulldown analyse. Bindingsspesifisiteten for interaksjonen mellom TSAd-SH2 og VEGFR2 pY951 ble analysert ved hjelp av peptidarray. Resultater: Det har blitt avdekket en rekke mulige interaksjonspartnere til TSAd-SH2 ved hjelp av peptidarrayscreening. MEKK2 og ITCH ble replikert på nytt array sammen med VCP. Bindingen til VCP så ut til å være sterkest til pY805, som er den nest siste aminosyren i VCP-sekvensen. Binding av TSAd-SH2 til VEGFR2 pY951 vedvarte selv etter trunkering av den C-terminale enden av peptidet. Ved trunkering av den N-terminale enden derimot forsvant signalet raskt. Binding av TSAd-SH2 til VEGFR-2 pY951 ble forsterket av å sette inn en asparagin i P+2 posisjonen og ved erstatte en sur aminosyre med enten en nøytral eller positiv ladet aminosyre i P-1 posisjonen. Pulldownforsøk med TSAd-SH2 som ”fiskestang” viste at en rekke tyrosin fosforylerte protein kan binde TSAd-SH2 både i ustimulerte, anti-CD3 aktiverte og pervanadatbehandlede prøver. Binding til SHP-1 og LAT ble bekreftet ved pulldown. Konklusjon: Det er identifisert nye bindingspartnere til TSAd-SH2 domenet. TSAd binder seg til flere mulige reseptorer og proteiner på T-celler som kan bidra til å modulere T-celle aktiveringen.