Abstract
Apoptose eller programmert celledød er en viktig fysiologisk prosess helt fra fosterutviklingen for å eliminere ødelagte eller unormale celler. Caspaser har en viktig rolle i regulering av apoptose og legumain ligner på disse i struktur og aminosyresekvens. Apoptose kan også skje ved frigjøring av lysosomale enzymer som cathepsiner til cytosol og flere cathepsiner er substrat for legumain. Legumain er overuttrykt i ustabile aterosklerotiske plakk og i mange kreftcelletyper. Atorvastatin er vist å nedregulere legumain mRNA-uttrykket og i denne oppgaven var målet å undersøke om statiner fører til endret aktivitet av legumain og celledød og dermed om legumain kan spille en rolle i dødsprosessen.
HEK 293 celler som basalt inneholder lite legumain og M38L-celler som overuttrykker legumain ble dyrket i ett døgn før de ble stimulert med statiner (syre- og laktonformen av atorva- og simvastatin) i ulike konsentrasjoner (10-400 µM) i 24 timer. Legumain- og caspase-3-aktivitet var målt ved hjelp av spesifikke fluorescerende substrater. Celleviabilitet ble målt med MTS-reagens etter at begge celletypene ble stimulert med statiner eller ulike apoptose-induserende stoffer (brefeldin A, bafilomycin A1, Leu-Leu-OMe og staurosporin) i 24 timer.
Legumainaktiviteten ble redusert med økende konsentrasjoner av både atorva- og simvastatin (syre- og laktonformen), men laktonformene hadde signifikant større hemmingseffekt på enzymaktiviteten i forhold til tilsvarende syreformer. Sammenligning av de to celletypene viste at simvastatin syreform hemmer legumain mer i M38L-celler enn i HEK 293 celler. Etter at HEK 293- og M38L-celler var behandlet med ulike apoptose-induserende stoffer viste resultatene ingen signifikant forskjell på celleviabiliteten mellom de to ulike celletypene. Vi observerte aktivering av caspase-3 når cellene ble stimulert med statiner. På grunn av stor spredning i resultatene var det vanskelig å trekke en konklusjon om de to ulike celletypene responderte forskjellig. Flere studier er nødvendig for å se om endret legumainaktivitet kan påvirke utviklingen av apoptose etter stimulering med staurosporin eller simvastatin laktonformen.