Molekylære responsmarkører for immundempende behandling hos transplanterte : Utvikling av metode for farmakodynamisk monitorering av mTOR-hemmere

Abstract

Formålet med dette prosjektet var å finne en metode for farmakodynamisk monitorering av mTOR-hemmere til bruk i kliniske studier blant transplanterte. Det var ønskelig å etablere en metode som var så enkel som mulig. En fordel med farmakodynamisk fremfor farmakokinetisk monitorering, er at man fanger opp konsekvensene av flere typer variasjon som kan påvirke responsen av et legemiddel.

Det ble forsøkt å sette opp to ulike enzymassay, der det ene direkte skulle bestemme aktiviteten av mTOR kompleks 1 og det andre indirekte skulle bestemme aktiviteten via en nedstrøms kinase, p70 S6K. Det ble prøvd ut flere ulike kvantifiseringsmetoder for begge disse. Det viste seg vanskelig å kvantifisere mTOR-aktivitet direkte ved enzymassayet som baserte seg på GFP-4E-BP1 som substrat og kvantifisering av ADP og ATP. Enzymassayet der det ble målt aktivitet av p70 S6K virker derimot lovende. Da kvantifiseringen baserte seg på bestemmelse av reduksjon av et p70 S6K-substrat, ble det observert økt reduksjon ved økt inkuberingstid eller økt cellekonsentrasjon. Ved hjelp av immunpresipitering av kinasen med påfølgende gjennomføring av enzymassayet, har det foreløpig ikke vært vellykket å bevise at det spesifikt er p70 S6K som står for substratreduksjonen.

Videre i dette prosjektet bør man finne en metode der man kan slå fast at det virkelig er p70 S6K som står for reduksjonen av substratet. Dersom dette lykkes, bør metoden prøves ut i pasientgrupper under mer kontrollerte betingelser enn det som er gjort hittil. Det bør undersøkes om det er noen sammenheng mellom aktivitet av p70 S6K og kliniske hendelser.