Heterolog ekspresjon i bakterie- og pattedyrceller av 37 kDa/67 kDa laminin reseptor; et protein som interagerer med prionproteinet, PrPc

Abstract

37 kDa/67 kDa laminin reseptor (LR) er et protein som antas å fungere som en reseptor for prionproteinet, og kan være en mulig kofaktor i omgjøringen av det cellulære prionproteinet, PrPc, til en infeksiøs form, PrPsc, som forårsaker bl. a Creutzfeld-Jacobs sykdom hos mennesker og andre overførbare spongiforme encefalopatier (TSE). LR er et multifunksjonelt protein som er involvert i celleadhesjon og proteinsyntese. LR har flere ulike isoformer avhengig av modningstilstanden. Heterolog ekspresjon i N2a og SH-SY5Y celler av LR ble utført, og lokalisering og distribusjon av LR i cella ble undersøkt gjennom Western-/immunoblot analyser, biokjemisk- og fluorescens protease protection assay og immunfarging. Resultatene antyder at LR er distribuert jevnt i cytosol, men ikke i nukleus. Proteinet er lokalisert på cellemembranen med C-terminalen ekstracellulært, noe er cytosolisk og noe sitter på indre membraner på cytosolisk side. Ko-lokalisering mellom LR og PrP fungerte ikke, mest sannsynlig på grunn av at begge proteinene er koblet til store tagger (RFP og GFP) som gir sterisk hindring.